GST標(biāo)簽蛋白(谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶標(biāo)簽蛋白)是一種廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)中的融合標(biāo)簽,用于重組蛋白的表達(dá)、純化和鑒定。GST(GlutathioneS-transferase)本身是一種具有酶活性的蛋白質(zhì),能夠結(jié)合谷胱甘肽,并在多種生物體內(nèi)參與解毒反應(yīng)。將GST與目標(biāo)蛋白融合后,能夠通過其親和力與谷胱甘肽結(jié)合,簡化蛋白的純化過程,廣泛應(yīng)用于蛋白表達(dá)與純化系統(tǒng)中。
GST標(biāo)簽蛋白通常由兩個部分組成:目標(biāo)蛋白和GST融合標(biāo)簽。GST作為標(biāo)簽,通常具有較高的親和力與谷胱甘肽結(jié)合,能夠?qū)⑷诤系鞍滋禺愋缘匚降胶泄入赘孰牡挠H和樹脂上。目標(biāo)蛋白與GST標(biāo)簽融合后,可以通過親和層析法從復(fù)雜的蛋白混合物中純化出來。 這種系統(tǒng)的一個優(yōu)勢是GST標(biāo)簽不僅有助于純化,還能幫助目標(biāo)蛋白在表達(dá)系統(tǒng)中的穩(wěn)定性。通過這種方式,即使目標(biāo)蛋白較難表達(dá)或容易降解,GST標(biāo)簽仍能提供一定的保護(hù)作用,保證目標(biāo)蛋白的高產(chǎn)量和活性。

應(yīng)用:
1.蛋白表達(dá)與純化
在蛋白質(zhì)工程和生物化學(xué)研究中,GST標(biāo)簽常用于重組蛋白的表達(dá)與純化。通常通過基因工程技術(shù)將GST基因與目標(biāo)蛋白的基因融合,并在大腸桿菌或酵母中進(jìn)行表達(dá)。之后,利用谷胱甘肽親和層析法對融合蛋白進(jìn)行純化。這種方法簡單、高效,是實(shí)驗(yàn)室常用的蛋白純化技術(shù)。
2.蛋白相互作用研究
由于GST標(biāo)簽具有較強(qiáng)的親和力,GST融合蛋白可以用來研究目標(biāo)蛋白與其他蛋白的相互作用。通過與谷胱甘肽標(biāo)記的親和樹脂結(jié)合,可以將目標(biāo)蛋白及其結(jié)合的蛋白一起從細(xì)胞裂解液中分離出來,從而進(jìn)行進(jìn)一步的相互作用分析。
3.免疫學(xué)研究
由于本身具有免疫原性,因此在免疫學(xué)中常用于抗體的產(chǎn)生和分析。通過注射GST融合蛋白,能夠誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生特異性的抗GST抗體,這對研究蛋白質(zhì)的表達(dá)、定位及功能具有重要意義。
GST標(biāo)簽蛋白的優(yōu)點(diǎn):
1.高效純化:可通過簡單的親和層析方法高效純化目標(biāo)蛋白。
2.提高穩(wěn)定性:有助于提高目標(biāo)蛋白的穩(wěn)定性,避免其在表達(dá)過程中降解。
3.應(yīng)用廣泛:適用于多種表達(dá)系統(tǒng)(如大腸桿菌、昆蟲細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞)。